本发明公开了一种抗菌肽天蚕素A突变体及其编码基因、制备方法和应用，所述突变体的氨基酸序列如SEQIDNo：3所示。编码上述突变体的基因的核苷酸序列如SEQIDNo：4所示。根据设计处的抗菌肽突变体PEW300的基因序列进行分子克隆，将其基因克隆至重组表达载体中，通过与自聚集短肽ELK16融合表达，实现突变体PEW300的高效表达。然后对获得的突变体肽PEW300进行9种指示菌的抑菌性能测试，结果显示抗菌肽PEW300的抑菌性能大大提高。并且具有较强的pH、热稳定性。添加高浓度的抗菌肽PEW300也不会出现溶血现象。