本发明涉及一种抗癌化合物的制备方法与应用。制备方法是：溪黄草干叶与２－４倍重量的乙醇加热至沸腾，回流提取，过滤得上清液，减压浓缩至原体积的５０－７０％，得浓缩液，冻干得粉末；将粉末溶于水中，过Ｄ１０１大孔树脂柱，采用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，得粉末Ａ；将粉末Ａ溶于水中，过ＨＰ－２０大孔树脂柱，采用７０－９０％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，得粉末Ｂ；将样品Ｂ溶于甲醇中使其浓度达到５－５０ｍｇ／ｍＬ，采用反相Ｃ１８柱进行梯度洗脱，收集４０％水，６０％甲醇洗脱出来的化合物峰。所述化合物应用于治疗肿瘤药物的制备中，具有人肝癌细胞株，人白血病细胞株和人乳腺癌细胞株毒性。