本发明公开了快速定量检测羟甲基糠醛的免疫层析试纸条及其制备方法。该免疫层析试纸条包括样品垫、荧光胶乳垫、包被膜、吸水纸和聚乙烯塑料底板；以聚乙烯塑料底板为支持底板，按从左到右样品垫、荧光胶乳垫、包被膜和吸水纸顺次搭接在支持底板上；将质量浓度为０．１ｍｇ／ｍｌ～２ｍｇ／ｍｌ的羊抗兔免疫球蛋白Ｇ和质量浓度为０．５ｍｇ／ｍｌ～５ｍｇ／ｍｌ的羟甲基糠醛完全抗原溶液分别均匀喷涂于硝酸纤维素膜上对应的质控区和检测区，然后将硝酸纤维素膜烘干，制成包被膜。应用本发明的免疫层析试纸条可定量检测出食品药品中羟甲基糠醛含量，且简便、快速、灵敏。